حذف دمین lg-like از آنزیم اندوگلوکاناز cel9a از باکتری alicyclobacillus acidocaldarius و بررسی خصوصیات این آنزیم

پایان نامه
چکیده

سلولازها آنزیم های چند واحدی می باشند. ساده ترین آنها تنها یک دمین کاتالیکی دارد اما معمولا دمین های کمکی نیز به آنها متصل می شود که فعالیت و ویژگی های کلی آنزیم را تحت تاثیر قرار می دهد. از آنجایی که سلولازها در صنایع مختلف و به ویژه در تولید سوخت زیستی از بیومس تجدپذیر و فراوان کره زمین نقش به سزایی دارد، مهندسی سلولازهایی با فعالیت بالا، پایداری دمایی بیشتر و پروفایل ph و دما گسترده تر مورد توجه قرار می گیرد. شناخت ساختار آنزیم، عملکرد دمین های تشکیل دهنده و تعیین ارتباط نسبی آن با فعالیت آنزیمی از جنبه زیستی و مهندسی آنزیم ها مهم می باشد. هم چنین شناخت عملکرد یک دمین در یک آنزیم را می توان به آنزیم های دیگری نیز تعمیم داد. دمین هایی با توپولوژی شبه ig یک دمین شایع در میان آنزیم ها می باشد که نقش تقریبا مبهمی دارد. اندوگلوکاناز cel9a باکتری اسیدوباسیلوس اسیدوکالداریوس یک سلولاز می باشد که دارای دمین عملکردی و دمین شبه ایمونوگلوبینی (ig) می باشد. به جز شبیه سازی های ساختاری، تا کنون هیچ مطالعات تجربی برای فهم عملکرد این دمین انجام نشده است. در این پژوهش با تکثیر ژن فاقد دمین شبه ایمونوگلوبینی (taa-cel9a) از روی ژن aa-cel9a و همسانه سازی آن داخل وکتور بیانی pet21، پروتئین کوتاه شده با فعالیت آنزیمی تولید گردید تا مطالعات آنزیمی به صورت تجربی جهت درک عملکرد دمین روی آن انجام بگیرد. نتایج نشان می دهد که حذف دمین شبه ایمونوگلوبینی خصوصیات بیوشیمیایی و ساختاری آنزیم را تحت تاثیر قرار داده است. در مقایسه با نوع وحشی، دمای بهینه، ph بهینه، پایداری دمایی آنزیم، انعطاف پذیری ساختاری و درصد ترکیب ساختار های دوم تغییر یافته است. دمای بهینه از 65 به 60 و ph بهینه از 6/5 به 7/5 تغییر یافته است. برخلاف انتظار پایداری دمایی افزایش یافته و ساختار آنزیم مستحکم تر و فشرده تر گردیده است. همچنین برخی از یون های فلزی که پایداری دمایی آنزیم نوع وحشی افزایش می دهند و ساختار آنزیم را فشرده تر می کنند, روی پایداری دمایی و ساختار آنزیم بدون دمین شبه ایمونوگلوبینی تاثیری نداشتند.

منابع مشابه

افزایش ویژگی‌های عملیاتی آنزیم اندوگلوکاناز از طریق تغییر اسیدآمینه‌ای

    Background & Aims : Ethanol produced from plant cellulose is called bioethanol and is recognized as a unique sustainable liquid fuel with powerful economic and environmental effects. In the present study we aimed at integrate a cellulase gene in to yeast genome to have the enzyme secreted out of the cell. Subsequently cellulose is depredated to glucose by the enzyme, and then it is ferment ...

متن کامل

The effect of cyclosporine on asymmetric antibodies and serum transforming growth factor beta1 in abortion-prone model of mice CBA/J x DBA/2

كچ ي هد فده و هقباس : ي ک ي طقس زورب للع زا اه ي ،ررکم ا لماوع تلاخد ي ژولونوم ي ک ا رد ي ن قم طققس عون ي وراد دقشاب ي س ي روپسولک ي ،ن ح لدم رد طقس شهاک بجوم ي ناو ي CBA/j×DBA/2 م ي تنآ ددرگ ي داب ي اه ي ان و راققتم TGF-β لماوع زا عت مهم يي ن گلماح تشونرس هدننک ي سررب روظنم هب رضاح هعلاطم تسا ي ات ث ي ر اس ي روپسولک ي ن م رب ي از ا ي ن تنآ عون ي داب ي س و اه ي اکوت ي ن TGF...

متن کامل

The Study of Stressful Factors in Clinical Education for Nursing Students Studying in Nursing and Midwifery College in Khorramabad

کچ هدي پ شي مز هني فده و : شزومآ لاب يني شخب ساسا ي شزومآ مهم و راتسرپ ي تسا . و هنوگ ره دوج لکشم ي شزومآ رد لاب يني ، آراک يي هدزاب و ا ني شزومآ زا شخب راچد ار لکشم م ي دنک . فده اب رضاح شهوژپ سررب ي لماوع سرتسا از ي شزومآ لاب يني رد وجشناد ناي راتسرپ ي هدکشناد راتسرپ ي و يامام ي ماـجنا داـبآ مرـخ تسا هتفرگ . شور و داوم راک : رضاح هعلاطم کي هعلاطم صوت يفي عطقم ي تسا . د...

متن کامل

کلونینگ ، بیان ژن، خالص سازی و تعیین خصوصیات آنزیم الاستاز حاصل از باکتری سودوموناس آئروجینوزا

سابقه و هدف: الاستاز حاصل از سودوموناس آئروجینوزا یک آنزیم مهم در زمینه مطالعات بنیادی بر روی Zn-متالوپروتئازها و نیز بعنوان فاکتور ویرولانس این باکتری مطرح است. در این مطالعه ژن مربوط به آنزیم الاستاز از سودوموناس آئروجینوزا (PAE) استخراج و کلون شده و پس از بیان و تخلیص، خصوصیات بیوشیمیایی آن شامل دما و pH بهینه و نیز فعالیت در حور حلالهای آلی گلیسرول، دی متیل فرمامید (DMF)، متانول، اتانول، ا...

متن کامل

بهینه سازی فعالیت آنزیم اندوگلوکاناز cel۹a از باکتری آلیسیکلوباسیلوس اسیدوکالداریوس با روش رویه پاسخ (rsm)

آنزیم اندوگلوکاناز cel9a از باکتری آلیسیکلوباسیلوس اسیدوکالداریوس (aacel9a) یک آنزیم گرمادوست بوده و پیوندهای بتا 1 به 4 را در مولکول سلولز به طور اتفاقی هیدرولیز کرده و الیگوساکاریدهایی با سرهای احیا کننده تولید می کند. در این تحقیق ابتدا وکتور pdest17 حاوی ژن آنزیم aacel9a جهت بیان پروتئین نوترکیب به میزبان مناسب (اشریشیا کلی سویه bl21) منتقل شده و بعد از بیان، با استفاده از ستون نیکل آگارز خ...

متن کامل

Complete genome sequence of Alicyclobacillus acidocaldarius strain Tc-4-1.

Alicyclobacillus acidocaldarius strain Tc-4-1 was initially isolated from a hot spring in Tengchong, China. This organism is both thermophilic and acidophilic. It can produce heat- and acid-stable enzymes, such as amylase and esterase, which may be important in industry. Here we report the whole genome sequence of the strain.

متن کامل

منابع من

با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید

ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده

{@ msg_add @}


نوع سند: پایان نامه

وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شهید مدنی آذربایجان - دانشکده علوم پایه

میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com

copyright © 2015-2023